Hemostatic evaluation of rabbits envenomed with Bothrops alternatus treated with anti-bothropic serum, desmopressin and tranexamin acid / Avaliação hemostática de coelhos envenenados com Bothrops alternatus e tratados com soro antibotrópico, desmopressina e ácido tranexâmico

In Brazil, snakes from the Bothrops genus are responsible for thousands of accidents, and their venoms are mainly composed of proteolytic enzymes. Although the antibothropic serum produced by the Brazilian Institutes is remarkably efficient, more studies are necessary, especially in veterinary medicine. The venom contain enzymes and non-enzymatic proteins that interfere with hemostasis leading to hemorrhage or even thrombosis. Possible treatment associations with known bothropic antivenom were the reason for the development of the present study. The aim of this study was to evaluate hemostasis alterations caused by Bothrops alternatus venom in rabbits followed by treatments with anti-bothropic serum, tranexamic acid and desmopressin. Twenty New Zealand rabbits were distributed into five groups (n=4) that were experimentally envenomed with 150mcg/kg of B. alternatus venom via intramuscular injection and treated as follow: Group 1 (G1) was the positive control and received venom and PBS/BSA; Group 2 (G2) was treated with tranexamic acid; Group 3 (G3) with desmopressin; Group 4 (G4) with tranexamic acid and anti-bothropic serum; and Group 5 (G5) with anti-bothropic serum and desmopressin. Blood samples were collected before venom administration, and one, four, eight and 12 hours after, for Partial activated partial thromboplastin time, Prothrombin Time, Thrombin Time and fibrinogen evaluation. Thrombin generation (TG) test was carried out with a pool of samples from final times (8 and 12h). At the end of 12h, all animals were euthanized and necropsy was conducted. Samples from muscle tissue, heart, lungs and kidney were analyzed. Classic coagulation tests showed no significant differences amongst groups and times. However, TG indicated that the venom causes a hypocoagulability state, which was not reversed by proposed treatments. Histology showed muscle inflammation, hemorrhage and necrosis, as well as hemorrhage in other tissues with no differences amongst groups. B. alternatus envenomation causes hypocoagulability detected by TG assay, but not through classical coagulation tests. The use of tranexamic acid and desmopressin for hemostasis stabilization after inoculation of the venom did not show advantage in coagulation restoration.(AU)

No Brasil, as serpentes do gênero Bothrops são responsáveis por milhares de acidentes, e seus venenos são compostos principalmente de enzimas proteolíticas. Embora o soro antiofídico produzido pelos institutos brasileiros seja notavelmente eficiente, mais estudos são necessários, especialmente na medicina veterinária. O veneno contem enzimas e proteínas não-enzimáticas que interferem com a hemostasia levando a hemorragias ou trombose. A associação de outros tratamentos ao soro antibotrópico foi a razão para o desenvolvimento do presente estudo. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações da hemostasia causadas pelo veneno de Bothrops alternatus em coelhos, após tratamento com soro antibotrópico, ácido tranexâmico e desmopressina. Vinte coelhos da Nova Zelândia foram distribuídos em cinco grupos (n = 4) que foram submetidos a experimentos com 150mcg/kg de veneno de B. alternatus por injeção intramuscular. O Grupo 1 (G1) foi o controle positivo e recebeu veneno e PBS / BSA, enquanto o Grupo 2 (G2) foi tratado com ácido tranexâmico, o Grupo 3 (G3) com desmopressina, o Grupo 4 (G4) com ácido tranexâmico e soro antibotrópico, e o Grupo 5 (G5) com soro antibotrópico e desmopressina. As amostras de sangue foram coletadas antes da administração do veneno, e uma, quatro, oito e 12 horas após os tratamentos para realização de tempo de tromboplastina parcial ativada parcial (TTPa), tempo de protrombina (TP), tempo de trombina (TT) e mensuração de fibrinogênio. Para o ensaio de geração de trombina (TG) foi realizado com um pool de amostras nos tempos finais (8 e 12h). Ao final das 12h, todos os animais foram sacrificados e a necropsia foi realizada. Amostras de tecido muscular, coração, pulmões e rins foram analisadas. Os testes TTPa, TP, TT e fibrinogênio não mostraram diferenças significativas entre os grupos e os tempos. No entanto, o TG indicou que o veneno causa um estado de hipocoagulabilidade, que não foi revertido pelos tratamentos propostos. Na histologia, foram observadas inflamação muscular, hemorragia e necrose, além de hemorragia em outros tecidos, sem diferenças entre os grupos. O envenenamento por B. alternatus causa hipocoagulabilidade detectada mais precocemente pelo teste de geração de trombina. O uso de ácido tranexâmico e desmopressina para estabilização da hemostasia após a inoculação do veneno não mostrou vantagem na restauração da coagulação.(AU)

In vitro haemostatic efficacy of aqueous, methanol and ethanol plant extracts of three medicinal plant species in Palestine / Eficácia hemostática in vitro de extratos aquosos, metanólicos e etanólicos de três espécies de plantas medicinais na Palestina

Abstract The haemostatic efficacy of different extract types of Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) and Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) was evaluated in this study via the Prothrombin time (PT) and Activated partial thromboplastin time (aPTT) analysis. Aqueous, methanol and ethanol extracts of the examined plant species leaves were prepared to a final concentration 50 mg/mL. In vitro PT and aPTT assays were conducted on normal platelet poor plasma blood samples by a digital coagulation analyzer. The obtained results revealed anticoagulation activity of all investigated plant species with observed variations among them. The aqueous and ethanol extracts of T. spicata as well as the aqueous extract of S. thymbra prolonged PT values significantly (p < 0.05). While, all V. fruticulosum extract types have had no significant effect on the PT values. The recorded aPTT data showed that all aqueous extracts have had a significant effect on the blood haemostasis as they increased aPTT values in all plant species under study. Out of which, both the ethanol and methanol extracts of T. spicata and methanol extract of S. thymbra showed similar effect. Of great concern, it was clearly noticed that the aqueous and ethanol extract of T. spicata and the aqueous extract of S. thymbra possess the strongest anticoagulation effect as they increased both PT and aPTT values significantly relative to the control (p < 0.05). The variable anticoagulation bioactivity among the studied plant species could be referred to the various solvents degrees of solubility of different phyto-constituents. Thus, the efficacy of the plant species extracts evaluation as anticoagulants or coagulants were related to the plant species and to the solvent of extraction.

Resumo A eficácia hemostática de diferentes tipos de extrato de Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) e Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) foi avaliada neste estudo pelo tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). Os extratos aquosos, metanólicos e etanólicos das folhas das espécies de plantas examinadas foram preparados para uma concentração final de 50 mg/mL. Os ensaios de TP e TTPa in vitro foram realizados em amostras normais de sangue, pobre em plaquetas, por um analisador de coagulação digital. Os resultados obtidos revelaram atividade anticoagulante de todas as espécies de plantas investigadas, com variações observadas dentre elas. Os extratos aquosos e etanólicos de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra prolongaram significativamente os valores de TP (p <0,05). Entretanto, todos os tipos de extratos de V. fruticulosum não tiveram efeito significativo sobre os valores de TP. Os dados registrados do TTPa mostraram que todos os extratos aquosos tiveram um efeito significativo na hemostase do sangue, pois aumentaram os valores de TTPa em todas as espécies de plantas em estudo. Dos quais, ambos os extratos etanólicos e metanólicos de T. spicata e o extrato metanólico de S. thymbra mostraram efeito semelhante. De grande preocupação, notou-se claramente que os extratos aquoso e etanólico de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra apresentam efeito anticoagulante mais forte, aumentando os valores de TP e TTPa significativamente em relação ao controle (p <0,05). A variável bioatividade anticoagulante dentre as espécies vegetais estudadas pôde ser referida aos vários graus de solventes de solubilidade de diferentes fitoconstituintes. Assim, a eficácia da avaliação de extratos de espécies vegetais como anticoagulantes ou coagulantes foi relacionada às espécies vegetais e ao solvente de extração.

Factor XIII-guided treatment algorithm reduces blood transfusion in burn surgery / Algoritmo de tratamento guiado pelo fator XIII reduz a transfusão sanguínea na cirurgia de queimados

Abstract Background and objectives: Major burn surgery causes large hemorrhage and coagulation dysfunction. Treatment algorithms guided by ROTEM® and factor VIIa reduce the need for blood products, but there is no evidence regarding factor XIII. Factor XIII deficiency changes clot stability and decreases wound healing. This study evaluates the efficacy and safety of factor XIII correction and its repercussion on transfusion requirements in burn surgery. Methods: Randomized retrospective study with 40 patients undergoing surgery at the Burn Unit, allocated into Group A those with factor XIII assessment (n = 20), and Group B, those without assessment (n = 20). Erythrocyte transfusion was guided by a hemoglobin trigger of 10 g.dL-1 and the other blood products by routine coagulation and ROTEM® tests. Analysis of blood product consumption included units of erythrocytes, fresh frozen plasma, platelets, and fibrinogen. The coagulation biomarker analysis compared the pre- and post-operative values. Results and conclusions: Group A (with factor XIII study) and Group B had identical total body surface area burned. All patients in Group A had a preoperative factor XIII deficiency, whose correction significantly reduced units of erythrocyte concentrate transfusion (1.95 vs. 4.05, p = 0.001). Pre- and post-operative coagulation biomarkers were similar between groups, revealing that routine coagulation tests did not identify factor XIII deficiency. There were no recorded thromboembolic events. Correction of factor XIII deficiency in burn surgery proved to be safe and effective for reducing perioperative transfusion of erythrocyte units.

Resumo Justificativa e objetivos: A cirurgia no grande queimado causa hemorragia de grande porte e disfunção da coagulação. Os algoritmos de tratamento guiados por ROTEM® e fator VIIa reduzem as necessidades de hemoderivados, mas falta evidência em relação ao fator XIII. A deficiência do fator XIII altera a estabilidade do coágulo e diminui a cicatrização. Este estudo avalia a eficácia e a segurança da correção do fator XIII e sua repercussão nas necessidades transfusionais na cirurgia do queimado. Métodos: Estudo retrospectivo randomizado de 40 doentes submetidos à cirurgia na Unidade de Queimados alocados em grupo A com estudo do fator XIII (n = 20) e grupo B sem estudo (n = 20). A transfusão eritrocitária foi guiada por gatilho de hemoglobina de 10 g.dL-1 e os outros hemoderivados por testes de coagulação de rotina e ROTEM®. A análise do consumo de hemoderivados incluiu unidades de eritrócitos, plasma fresco congelado, plaquetas e fibrinogênio. A análise dos biomarcadores da coagulação comparou os valores pré e pós-operatórios. Resultados e conclusões: O grupo A (com estudo de fator XIII) e o grupo B apresentaram área de superfície corporal total queimada idêntica. Todos os doentes do grupo A revelaram déficit pré-operatório de fator XIII, cuja correção reduziu significativamente a transfusão de unidades de concentrado eritrocitário (1,95 vs. 4,05, p = 0,001). Os biomarcadores de coagulação pré e pós-operatórios foram semelhantes entre os grupos, revelaram que os testes de coagulação de rotina não identificam o déficit de fator XIII. Sem eventos tromboembólicos registrados. A correção do fator XIII na cirurgia do queimado revelou-se segura e eficaz na redução da transfusão perioperatória de unidades de eritrócitos.

In vitro haemostatic efficacy of aqueous, methanol and ethanol plant extracts of three medicinal plant species in Palestine

Abstract The haemostatic efficacy of different extract types of Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) and Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) was evaluated in this study via the Prothrombin time (PT) and Activated partial thromboplastin time (aPTT) analysis. Aqueous, methanol and ethanol extracts of the examined plant species leaves were prepared to a final concentration 50 mg/mL. In vitro PT and aPTT assays were conducted on normal platelet poor plasma blood samples by a digital coagulation analyzer. The obtained results revealed anticoagulation activity of all investigated plant species with observed variations among them. The aqueous and ethanol extracts of T. spicata as well as the aqueous extract of S. thymbra prolonged PT values significantly (p 0.05). While, all V. fruticulosum extract types have had no significant effect on the PT values. The recorded aPTT data showed that all aqueous extracts have had a significant effect on the blood haemostasis as they increased aPTT values in all plant species under study. Out of which, both the ethanol and methanol extracts of T. spicata and methanol extract of S. thymbra showed similar effect. Of great concern, it was clearly noticed that the aqueous and ethanol extract of T. spicata and the aqueous extract of S. thymbra possess the strongest anticoagulation effect as they increased both PT and aPTT values significantly relative to the control (p 0.05). The variable anticoagulation bioactivity among the studied plant species could be referred to the various solvents degrees of solubility of different phyto-constituents. Thus, the efficacy of the plant species extracts evaluation as anticoagulants or coagulants were related to the plant species and to the solvent of extraction.

Resumo A eficácia hemostática de diferentes tipos de extrato de Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) e Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) foi avaliada neste estudo pelo tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). Os extratos aquosos, metanólicos e etanólicos das folhas das espécies de plantas examinadas foram preparados para uma concentração final de 50 mg/mL. Os ensaios de TP e TTPa in vitro foram realizados em amostras normais de sangue, pobre em plaquetas, por um analisador de coagulação digital. Os resultados obtidos revelaram atividade anticoagulante de todas as espécies de plantas investigadas, com variações observadas dentre elas. Os extratos aquosos e etanólicos de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra prolongaram significativamente os valores de TP (p 0,05). Entretanto, todos os tipos de extratos de V. fruticulosum não tiveram efeito significativo sobre os valores de TP. Os dados registrados do TTPa mostraram que todos os extratos aquosos tiveram um efeito significativo na hemostase do sangue, pois aumentaram os valores de TTPa em todas as espécies de plantas em estudo. Dos quais, ambos os extratos etanólicos e metanólicos de T. spicata e o extrato metanólico de S. thymbra mostraram efeito semelhante. De grande preocupação, notou-se claramente que os extratos aquoso e etanólico de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra apresentam efeito anticoagulante mais forte, aumentando os valores de TP e TTPa significativamente em relação ao controle (p 0,05). A variável bioatividade anticoagulante dentre as espécies vegetais estudadas pôde ser referida aos vários graus de solventes de solubilidade de diferentes fitoconstituintes. Assim, a eficácia da avaliação de extratos de espécies vegetais como anticoagulantes ou coagulantes foi relacionada às espécies vegetais e ao solvente de extração.

Así comienza la vida plaquetaria: un viaje desde los megacariocitos medulares a las plaquetas circulantes / The birth of a platelet: A trip from bone marrow megakaryocytes to circulating platelets / Começa assim a vida plaquetária: uma viagem desde os megacariócitos medulares às plaquetas circulantes

Tal vez por haber sido consideradas como simples restos citoplasmáticos de los megacariocitos encargadas únicamente de la reparación de heridas, las plaquetas han tenido un lugar secundario en cuanto a su estudio e interés en comparación con los otros componentes celulares de la sangre. Sin embargo, en los últimos 20 años se ha avanzado mucho en el conocimiento de estas fascinantes células que de a poco han recobrado un lugar destacado dentro de la hematología. A lo largo de este trabajo se han revisado los aportes más destacados y novedosos acerca del proceso de biogénesis plaquetaria, su regulación por el microambiente medular y factores humorales, recorriendo desde la generación de megacariocitos hasta la liberación de plaquetas libres.

Perhaps for being considered mere megakaryocyte cytoplasmic debris responsible for wound repair alone, platelets have had a secondary role when compared to other cellular blood components. However, in the last 20 years we have learned much more about these fascinating cells, which have slowly regained a prominent place in hematology. This review discusses the most outstanding and novel contributions on platelet biogenesis, its regulation by the bone marrow microenvironment and humoral factors, analyzing from megakaryocyte generation to platelet release.

Talvez por ter sido considerados simples restos citoplasmáticos dos megacariócitos, encarregadas apenas da reparação de feridas, as plaquetas têm tido um lugar secundário quanto a seu estudo e interesse em comparação com os outros componentes celulares do sangue. Entretanto, nos últimos 20 anos foi possível aprender muito a respeito destas fascinantes células que aos poucos foram recobrando um lugar de destaque dentro da hematologia. Ao longo deste trabalho foram revistas as contribuições mais destacadas e novas acerca do processo de biogênese plaquetária, sua regulação pelo microambiente medular e fatores humorais, percorrendo desde a geração de megacariócitos até a liberação de plaquetas livres.